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流式-JC-1(培养细胞)

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  • 亚博体育官方在线简介

    线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1是一种理想的用于检测线粒体膜电位的荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。其原理是,当线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体基质中,形成聚合物,488nm激发时的最大发射波长为590nm,可以产生红色荧光,在流式上表现为FL1FL2双阳性;当线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体,488nm激发时最大发射波长为527nm,可以产生绿色荧光,形成流式图汇总所有细胞FL1为阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化,亚博体育app官方下载苹果红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。

    二、流式JC-1亚博体育官方在线步骤

    1收集细胞细胞悬液转入离心管中,1000rpm离心5min收集细胞,弃上清。

    2PBS洗涤细胞加入3ml  4预冷的PBS完全重悬细胞,1000rpm离心5min,弃上清。沉淀震荡混匀。

    3细胞计数移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数 ,调整细胞为0.5-1×10^6/ml

    4装载探针:按照1:500用无血清培养基稀释JC-1,使终浓度为10ug/mL

    5孵育探针:37°C细胞培养箱内孵育20分钟,每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触,用无血清的培养液洗涤细胞三次,以去除未进入细胞内的探针。

    6上机检测:流式细胞仪使用激发波长Ex=488 nm,发射波长FL1(Em=525±20 nm)FL2(Em=585±20 nm),用Flow Jo软件分析结果


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