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流式-ROS(培养细胞)

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  • 产品说明
  • 一、亚博体育官方在线原理

    活性氧簇ROS是由氧分子还原所形成的分子或者离子,大部分都是由线粒体产生的副产物,它们会在细胞代谢包括细胞内呼吸和底物氧化过程中产生。适量的ROS是细胞必需的,因为ROS参与维持细胞存活及生理功能所需的各种生活过程,如信号转导和基因表达,但过量或过少的ROS都会诱导氧化应激,破坏核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物和细胞膜等,导致细胞死亡和组织破坏。

    DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞后,被水解生成DCFH。而DCFH不能透过细胞膜。细胞内的ROS可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCFDCF488nm激发光激发后,发射530nm的荧光信号,被FITC通道接收,检测DCF的荧光就可以判定细胞内活性氧ROS的水平。

    亚博体育官方在线步骤

    1收集细胞细胞悬液转入离心管中,1500 rpm离心5 min收集细胞,弃上清。

    2PBS洗涤细胞加入3ml 4预冷的PBS完全重悬细胞,1500 rpm离心5 min,弃上清。沉淀震荡混匀。

    3细胞计数移取10 ul在血细胞计数仪上进行细胞计数 ,调整细胞为1×10^6-2×10^8/ml

    4装载探针:按照1:1000用无血清培养基稀释DCFH-DA,使终浓度为10umol/L

    5孵育探针:37细胞培养箱内孵育20 min,每隔3-5 min颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触,用无血清的培养液洗涤细胞三次,以去除未进入细胞内的探针。

    6上机检测:流式细胞仪使用激发波长488 nm,发射波长525±20 nm进行检测,用FlowJo软件分析细胞ROS水平

    三、结果分析


    样本编号

    平均荧光强度

    THP-1-nc.fcs

    1395

    THP-1-rosup.fcs

    6221

    THP-1.fcs

    18397


    结果说明平均荧光强度值越大表明细胞内ROS含量越高。


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