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PI染色

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  • 产品说明
  • PI染色试验操作说明

    1. 培养的单层细胞或孵育过荧光抗体的组织切片等。0.01mol/L PBS漂洗三次,每次5min

    2. PI工作液,室温避光孵育10min(可根据亚博体育官方在线材料的染色结果而定)。

    3. PBS漂洗三次,每次5min

    4. 水溶性封片剂封片后荧光显微镜下观察。

    结果:正常细胞一般不会被染上颜色,细胞发生凋亡时,细胞核呈红色荧光。如果细胞经破膜处理后再染色,所有细胞核均可看到红色荧光。

    流式周期亚博体育官方在线操作说明

    1加入1ml 0.25%胰酶消化细胞,待细胞变圆且有部分细胞悬浮,即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞,使细胞悬浮。

    2细胞悬液转入离心管中1500rpm离心5min收集细胞。

    3、沉淀用3ml PBS重悬1500rpm离心5min收集细胞。

    4、沉淀中缓慢加入-20预冷的90%乙醇,重悬细胞,冰浴过夜

    51500rpm离心5min收集细胞, PBS重悬,离心收集细胞。

    6、加入250ul PBS重悬细胞。

    72μl 浓度为1mg/ml RNaseA(去离子水配),37水浴40min

    8加入50μl浓度为100μg/ml PI染色液,避光染色20min

    9、上机检测及结果处理。流式细胞仪激发波长488nm,用Cell Quest Modfit 软件分析细胞周期确定细胞周期分布。

     

    注意事项:

     

    1. PI对人体有刺激性,操作时请穿亚博体育官方在线服并带手套。

    2. 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。

    3. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片剂封片,抗荧光淬灭封片剂可以向武汉谷歌生物订购。


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