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活细胞内钙离子检测

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  • 产品说明
  • 1 亚博体育官方在线简介

    Fluo-3广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506 nm处被吸收,可以被氩离子激光的488 nm激发光激发,便于检测。Fluo-3在没有同钙结合的情况下,无荧光产生。但是,在与钙结合后,荧光(526 nm)增强至少40倍。Fluo-3/AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3/AM的荧光非常弱,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3/AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为506 nm,最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右,发射波长为525-530 nm

    2 亚博体育官方在线步骤

    1) 用激光共聚焦专用培养皿培养细胞。去除培养基后,用PBS洗涤细胞,然后加入适量含有fluo-3/AMPBS缓冲液(fluo-3/AM终浓度为0.5-5 μM),置于37避光孵育 30分钟。探针浓度和负载时间需要根据细胞类型进行调整可查阅文献

    2) PBS溶液轻洗2次,再加入PBS缓冲液,继续孵育20 min37℃,确保fluo-3/AM在胞内完全水解成fluo-3

    3) LCSM采集荧光信号,激发波长488 nm,发射波长525 nm

    注意此处理方法适用于贴壁细胞。如果是悬浮细胞或半悬浮细胞可低速离心收集细胞后进行处理然后取细胞悬液滴在共聚焦专用盖玻片上直接观察


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