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平板克隆形成亚博体育官方在线

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    当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,称为集落或者克隆。每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0mm之间集落形成率表示细胞的独立生存能力细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数但贴壁的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。因此克隆形成率也反映细胞群体依赖性和增殖能力这两个重要形状。细胞克隆形成可以通过平板克隆形成及软琼脂克隆形成两种方式实现,前者适用于贴壁生长的细胞,后者适用于非锚定着依赖性生长的悬浮细胞,如骨髓造血干细胞、悬浮肿瘤细胞等。

    二、平板克隆形亚博体育官方在线步骤

    1细胞悬液制备取对数生长期的单层培养细胞,用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,离心后用完全培养基重悬,制成细胞悬液。

    2细胞种板将细胞悬液作梯度倍数稀释,以每皿50、10020050010002000个细胞的梯度密度分别接种含1 mL 37 ℃预热培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37 5% CO2的环境下,静置培养。

    3细胞观察显微镜下观察到单个细胞长到20个以上细胞克隆,培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加纯甲醇1mL,固定15分钟。然后去固定液,加适量Giemsa应用染色液染10分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥,手记拍照采集图像。

    4克隆计数用肉眼直接计数克隆数,最后计算克隆形成率。

    三、结果分析

        克隆形成率= 克隆数/接种细胞数×100% 


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