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双荧光素酶报告基因

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  • 一、亚博体育官方在线简介

      报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。

    本亚博体育官方在线采用荧火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)和海肾荧光素酶(Rellina Luciferase)组成双荧光素酶报告基因亚博体育官方在线系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)。通过加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应过程中会发出生物荧光,然后可以通过化学发光仪测定反应过程中释放的生物荧光,从而比较不同组间基因表达的差异。 

    亚博体育官方在线流程

    1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒;

    2、细胞系选择: 根据亚博体育官方在线需要选择细胞株,通常选择转染效率较高的293T细胞;

    3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染,设置不同的检测时间点,一般为24h/48h

    4、外界干预: 转染后,可选择性进行物理/化学/病毒等的相应刺激;

    5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测亚博体育ios官方下载盒依照protocol操作;

    6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测


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